Анализ крови на пцр что это?

Важно знать, когда для исследования необходимо сдать кровь на ПЦР, что это на сегодняшний день самый быстрый и достоверный метод диагностики инфекционных заболеваний.

Посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР), при помощи экспериментов молекулярной биологии, заметно увеличиваются небольшие концентрации отдельных отрезков дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) в клинической пробе.

Суть заключается в многократно повторяющемся возрастании вдвое некоторого отрезка ДНК под воздействием активных веществ в неестественных исходных данных. Происходит наработка примеров ДНК, которых хватит для того, чтобы стала возможной визуальная детекция. Во время этого копируется исключительно отрезок, удовлетворяющий нужному условию, только при его присутствии в составе исследуемого образца.

Первым этапом является амплификация – простое повышение аналогичных участков ДНК. Далее этим анализом производятся различные реакции с пробами клинических образцов (вводятся изменения, происходит контролируемое срастание куска ДНК с иными фрагментами). Полимеразная цепная реакция получила распространение в таких практиках, как биологическая и медицинская. Можно устанавливать отцовство, производить клонирование генов, вводить мутации, выделять новые генные.

Функции и специфика

Исследование методом ПЦР превратилось для многих инфекционных болезней в эталон, выдерживающий испытание в течение времени особо большого числа придирчивых клинических проб. Оно сделало реальным выявление присутствия раздражителя заболеваний в крови. Это представляет наибольшую важность при наличии в пробном образце крови даже малого числа молекул ДНК, принадлежащих носителю. При проверке крови таким образом выполняется определяется диагноз присутствия такого возбудителя, склоненного к ускоренному росту. Без применения материалозатратных микробиологических испытаний, это имеет большое значение в области гинекологических и урологических анализов для выявления урогенитальной инфекции и болезней, которые передаются исключительно при половом контакте.

Иммунохимическое и микробиологические методы весьма уступают этому по степени восприимчивости. Существенного показателя антигенной изменчивости, присутствующего при диагностировании проявления инфекции, удалось достичь благодаря поэтапному анализу.

Показатель специфичности во время использования технологий ПЦР равен 100% в случаях абсолютно всех бактериальных инфекций. В их числе: вирусные, хламидийные, микроплазменные, уреаплазменные. Реальным становится выявление и единичных клеток вирусов и бактерий. Анализ крови на ПЦР позволяет обнаруживать присутствие провокатора инфекционной болезни в таких вариантах, когда никак нельзя выполнить это иммунологическим, микроскопическим или бактериологическим способом.

Упрощение установления диагноза

Особо результативно будет сдать кровь на ПЦР, если требуется диагностика того микроорганизма, который нелегко культивируемый, некультивируемый, бессимптомный. Они нередко встречаются во время латентных и хронических инфекций.

Эффективность этого исследования применима еще и для внутриклеточного паразита и такого возбудителя, который имеет повышенную антигенную изменчивость. Из водных и почвенных составов также возможным является забор материала, там тоже удается выявить возбудителя при помощи метода ПЦР. Урологическая и гинекологическая практики применяют этот анализ и выявляют различные болезни: микроплазменная инфекция, гонорея, хламидиоз, гарднереллез, ВПЧ (вирус папилломы человека), уреаплазмоз. Пульмонология проводит благодаря ему дифференциальную диагностику вирусной и бактериальной пневмонии, стадий туберкулеза. Гастроэнтерология использует при выявлении такого недуга, как хеликобактериоз. Он также может служить экспресс-методом, применяемым клиникой инфекционных болезней, в ситуациях, когда проводится диагностика заболеваний (сальмонеллез, дифтерия, вирусные гепатиты В, С и G). Онковирусы и цитомегаловирусная инфекция гематологией выявляется тоже с его использование.

Комплементарные комплексы среди матриц и праймеров (недлинных синтетических олигонуклеотитов, длина которых 18-30 символов) своим образованием отличают непосредственность ПЦР от иных видов. На амплифицируемом участке происходит обрамление начала и конца каждым из праймеров, сопоставимых (комплементарных) с одной из цепей двухцепочечной матрицы.

Происходит гибридизация (объединение) матриц и праймеров (отжиг), служащих в качестве затравки для ДНК-полимеразы во время синтеза одной из комплементарных цепей матриц.

Метод проведения ПЦР

Наличие таких компонентов потребуется для обычного случая выполнения ПЦР: ДНК-матрицы, которая содержит нужный отрезок ДНК, для амплифицирования; двух праймеров, комплементарных концам нужного участка; термостабильной ДНК-полимеразы; дезоксинуклеотидтрифосфатов; ионов магния, требуемых функционированием полимеразы; буферного раствора.

Амплификатор является прибором, в котором можно провести ПЦР. Он обеспечивает возможность поэтапного снижения подогрева и нагрева мензурок. Наиболее часто точность составляет не меньше 0,1°C. Во избежание испарений реагирующих составов производят добавление внутрь мензурки высококипящего маслянистого вещества. Непосредственная реакция

Стандартным является выполнение до 40 раз, состоящих из нескольких промежутков. Двухцепочечная ДНК-матрица нагревается до 100°C. В случае использования особо термостабильной полимеразы температура нужна до 98°C. Для расхождения цепей ДНК потребуется время до 2 минут. Денатурация – разрушение водородных связей между двумя цепями. Периодически требуется проведение первичного прогрева реагирующего состава на протяжении пяти минут, тогда выполняется полная денатурация матриц и праймеров.

При расхождении цепи температура понижается, для выполнения связи праймеров с одноцепочечной матрицей. Это – отжиг.

Температуру, зависящую от праймеров, стандартно выбирают до 5°C ниже температур плавления.

Продолжительность невелика.

Матричная цепь реплицируется ДНК-полимеразой с использованием праймера как заправки. Это элонгация. Ее температурный режим подчинен полимеразе. В основном наибольшая реакция последних проявляется при 72ºС. На продолжительность периода, когда протекает элонгация, влияет тип ДНК-полимеразы, длина того участка, который амплифицируется. Принято за ее временное течение принимать период времени, равный 1 минуте (продолжительность для каждой тысячи пар оснований).

Объективность и точность анализа обеспечивается правильностью сбора анализируемого материала у больного и проведением его первичной внимательной подготовки.